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GBC-SD+luc人膽囊癌細(xì)胞+luc傳代/復(fù)蘇技巧
點(diǎn)擊次數(shù):309 更新時(shí)間:2024-08-21

GBC-SD+luc人膽囊癌細(xì)胞+luc

Human gallbladder cancer cell ,GBCSD luc

貨號(hào):YJ-0025a(STR(GBC-SD)鑒定)

價(jià)格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

GBC-SD 細(xì)胞株是王展明等2000年從一位61歲的男性低分化膽囊癌患者中建立的。 細(xì)胞的形狀有多邊形、紡錘形和正方形。 分泌CEACA19-9。倍增時(shí)間大約為21.4小時(shí)。 可移植到裸鼠。 生成的腫瘤與原發(fā)腫瘤相似。 在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)。 在本庫(kù)通過(guò)STR檢測(cè)。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1 來(lái)源:膽囊癌 男

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣  貼壁生長(zhǎng)

3 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備:1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦:YJ-0002),優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %,P/S 1 %

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

GBC-SD+luc人膽囊癌細(xì)胞+luc.png


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